Estandarización de la metodología in vitro para evaluar la absorción intestinal de ampicilina liberada por el polímero PAM 18Na.

Abstract

Para la predicción de la permeabilidad intestinal de los fármacos, se han desarrollado diversos métodos experimentales, entre los que se destacan las determinaciones in vivo, in situ e in vitro. Las tres varían en complejidad experimental y en costo de ejecución El siguiente trabajo tiene como objetivo principal estandarizar una metodología de permeabilidad in vitro en monocapas de células Caco-2. La importancia de esta investigación radica en la obligación legal que tienen las industrias en Colombia de presentar estudios de biodisponibilidad y bioequivalencia para el registro sanitario de un medicamento. Para llevar a cabo la estandarización de la metodología, se utilizaron monocapas diferenciadas de Caco-2, sobre las cuales se aplicaba una cantidad de fármaco conocida. Posteriormente en tiempos establecidos, se tomaban muestras para determinar la cantidad de fármaco que atravesaba la membrana, para la cuantificación de estos valores, se utilizó una metodología validada con técnica UPLC. Adicionalmente, fue necesario medir la integridad de las membranas de manera directa e indirecta, por medio de la resistencia eléctrica transepitelial (TEER) y la permeabilidad del reactivo Amarillo de Lucifer, el cual responde a una tintura fluorescente y sólo atraviesa la membrana cuando ésta se encuentra integra y las uniones entre las células es adecuada. Con los resultados, se determinaron los coeficientes de permeabilidad aparente (Pap) para cada fármaco evaluado, Ampicilina y Metoprolol, reportados en cm/seg. Por otra parte, también se determinaron los coeficientes de permeabilidad de los mismos fármacos, en presencia del polímero PAM 18 Na. Los resultados obtenidos muestran un Pap para la Ampicilina de 1,02 x10-5 ± 1,4 x10-5 cm/seg en ausencia del polímero, y un Pap de 9,42 x10-7 ± 1,2 x10-7 cm/seg presencia del polímero.