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Ítem Producción del Factor de Crecimiento Epidérmico Humano recombinante en Komagataella pastoris (Pichia pastoris)(Universidad Icesi, 2024-12-12) López Carvajal, María Camila; Moreno Pino, Juan José; David Jiménez, Steven Alexander; Caicedo Burbano, Paola AndreaLa producción de proteínas recombinantes en levaduras se ha vuelto cada vez más frecuente debido a los beneficios que representan, tales como su fácil manipulación, la capacidad para generar modificaciones postraduccionales y la alta viabilidad para el escalado del proceso. Dentro de las proteínas producidas en dicho microorganismo se encuentra n algunas con potencial terapéutico, y otras con aplicaciones cosmétic as . Una de estas es el factor de crecimiento epidérmico humano (hEGF ) , el cual es un polipéptido que se encuentra de forma natural en orina, plaquetas leche y plasma, se conoce que es fundamental en las vías de señalización celular que r egulan la división y la supervivencia celular . Además , se ha demostrado una buena capacidad en la reparación tisular , por lo que , es empleado en estudios para la regeneración de la piel en diversos campos que van desde curación de heridas hasta el tratamiento contra arrugas . E s importante destacar que hoy en día su producción no es lo suficientemente eficiente para la demanda que se tiene y que se espera . A partir de lo anterior , se ha planteado este proyecto , en búsqueda de desarrollar e implementar una metodología para la producción de este factor de manera recombinante mediante el uso de la levadura Komagatella pastoris , generando así conocimiento para diferentes sectores de la economía como lo son el educativo y el industrial.Ítem Expresión y determinación de la actividad enzimática de la tirosina descarboxilasa (TYDC) en E. coli BL21 (DE3) para la biosíntesis de p-tiramina a partir de l-tirosina(Universidad Icesi, 2022-12-07) Cuero Montalvo, Kevin Stiven; Barrera Ocampo, Álvaro Andrés; Caicedo Burbano, Paola Andrea; Asesor Tesis; Asesor TesisLa Tirosina Descarboxilasa (TyDC) constituye una enzima de gran relevancia en la biosíntesis de alcaloides en plantas de la familia de las Amarilidáceas, entre estos tenemos la licorina. Con ello, se lleva a cabo la expresión genética y determinación de los parámetros cinéticos de la Tirosina Descarboxilasa en E. coli BL21 (DE3) de manera in vitro, para la biosíntesis de p-tiramina. Inicialmente, se empleó el clúster genético pM20-tdcA, que, en principio, tiene el gen codificante de la enzima. Se transformó genéticamente a E. coli BL21 (DE3). Se validó la presencia del gen mediante la técnica molecular de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) y Secuenciación Automatizada de Sanger. Con lo anterior, se hipotetiza que las condiciones de expresión génica de dicha enzima, podría corresponder a 0.3 mM de IPTG, 14°C a 6h. Igualmente, se estima que la concentración de enzima en los extractos bacterianos de 0.0367, 0.0343 y 0.0218 mg/mL para las fracciones correspondiente al Extracto Total de Proteínas (ETP), Lisado Clarificado (LC) y Cuerpos de Inclusión (CI) respectivamente. Así se obtiene una constante catalítica (Kcat) de 0.397 s-1 , una velocidad máxima (Vmax) de 0.00197 mMs-1 , una constante de Michaelis-Menten de 14.6 mM y una Unidad de Actividad Específico del extracto bacteriano (U/mg) de 0.00937. La gran mayoría de estos parámetros, podrían estar asociados a la enzima en la célula y no de manera pura. Lo mencionado, permite obtener resultados experimentales de carácter bioquímico y molecular de dicha enzima, para su posterior implementación en una fábrica biológica funcional.