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Ítem Expresión y determinación de la actividad enzimática de la tirosina descarboxilasa (TYDC) en E. coli BL21 (DE3) para la biosíntesis de p-tiramina a partir de l-tirosina(Universidad Icesi, 2022-12-07) Cuero Montalvo, Kevin Stiven; Barrera Ocampo, Álvaro Andrés; Caicedo Burbano, Paola Andrea; Asesor Tesis; Asesor TesisLa Tirosina Descarboxilasa (TyDC) constituye una enzima de gran relevancia en la biosíntesis de alcaloides en plantas de la familia de las Amarilidáceas, entre estos tenemos la licorina. Con ello, se lleva a cabo la expresión genética y determinación de los parámetros cinéticos de la Tirosina Descarboxilasa en E. coli BL21 (DE3) de manera in vitro, para la biosíntesis de p-tiramina. Inicialmente, se empleó el clúster genético pM20-tdcA, que, en principio, tiene el gen codificante de la enzima. Se transformó genéticamente a E. coli BL21 (DE3). Se validó la presencia del gen mediante la técnica molecular de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) y Secuenciación Automatizada de Sanger. Con lo anterior, se hipotetiza que las condiciones de expresión génica de dicha enzima, podría corresponder a 0.3 mM de IPTG, 14°C a 6h. Igualmente, se estima que la concentración de enzima en los extractos bacterianos de 0.0367, 0.0343 y 0.0218 mg/mL para las fracciones correspondiente al Extracto Total de Proteínas (ETP), Lisado Clarificado (LC) y Cuerpos de Inclusión (CI) respectivamente. Así se obtiene una constante catalítica (Kcat) de 0.397 s-1 , una velocidad máxima (Vmax) de 0.00197 mMs-1 , una constante de Michaelis-Menten de 14.6 mM y una Unidad de Actividad Específico del extracto bacteriano (U/mg) de 0.00937. La gran mayoría de estos parámetros, podrían estar asociados a la enzima en la célula y no de manera pura. Lo mencionado, permite obtener resultados experimentales de carácter bioquímico y molecular de dicha enzima, para su posterior implementación en una fábrica biológica funcional.Ítem Obtención de un surfactante derivado de L-arginina(Universidad Icesi, 2020-01-01) Rodríguez Murcia, Laura Marcela; Rojas Jiménez, Giovanni; Asesor TesisDebido a su gran versatilidad, los surfactantes son ampliamente utilizados en aplicaciones domésticas e industriales, sin embargo, tras su uso se descargan en los sistemas de alcantarillado o directamente en las aguas superficiales, afectando la biota marina. A partir de este panorama surge la necesidad de generar surfactantes cuya biodegradabilidad, biocompatibilidad y baja toxicidad sean características. Los surfactantes derivados de aminoácidos son una alternativa a esta problemática ya que son fáciles de sintetizar, tienen baja toxicidad y alta degradabilidad. Por ello el proyecto, busca proponer una metodología que permita la síntesis de un surfactante a partir de la reacción entre derivados de L-arginina, cloruro de palmitoílo y ácido palmítico, haciendo uso de condiciones Schotten Baumann y de N, N'-diciclohexilcarbodiimida respectivamente. Primero se obtuvo el derivado esterificado de L-arginina con un rendimiento de 88 %, la identidad del compuesto fue confirmada por medio de espectroscopia infrarroja y espectrometría de masas. Posteriormente, con el intermediario obtenido se realizó la reacción de obtención del surfactante por las dos metodologías planteadas, sin embargo, ninguna resulto ser eficiente en la obtención del compuesto deseado ya que se obtuvo subproductos indeseados, probablemente por problemas con la desactivación del cloruro de palmitoílo, el control estricto del pH en la reacción, la presencia de agua y las reacciones laterales existentes.Ítem Modelo computacional del bloqueo del canal de potasio Kv13 por mutantes de las toxinas meutxka1 y meutxka3(Universidad Icesi, 2016-01-01) Duque Valderrutén, Katherin; Arango Mambuscay, Carlos Alberto; Asesor TesisLos canales de potasio dependientes de voltaje son sumamente importantes para la vida, ya que se encuentran en células excitables como las neuronales y en células musculares (O’Connor & Adams, 2010). En especial se ha demostrado que el canal de potasio Kv1.3 se encuentra implicado en la señalización, función y proliferación de células T (Wulff et al., 2003). Debido a lo anterior, el canal Kv1.3 es asociado a patologías mediadas por células T, como esclerosis múltiple, diabetes mellitus y artritis reumatoide. Por ello, un bloqueador selectivo de este canal podría impedir la propagación de las células T y sería un potente inmunosupresor.Ítem Análisis del efecto de d-aminoacidos sobre el crecimiento de arabidopsis thaliana y de la participacion de los transportadores trans-membrana AAP1, AAP5 Y LHT1 en este proceso.(Universidad Icesi, 2014-09-01) Suárez Villada , Juan Sebastian; Ghneim Herrera, Thaura; Kolukisaoglu, Üner; Asesor TesisLos aminoácidos se presentan en dos configuraciones estructurales: Los enantiómeros levógiros (L-Aminoácidos) y los dextrógiros (D-Aminoácidos). Tradicionalmente, se ha asumido que los D-Aminoácidos representan especies tóxicas para las plantas pues no pueden ser metabolizados por éstas. El objetivo de este trabajo es abordar la situación contradictoria que ha surgido ya que algunos estudios publicados reportan que diferentes D-Aminoácidos tienen efectos tóxicos, mientras que otros reportan que estos compuestos pueden cumplir un rol fisiológico en las plantas o servir como fuente de nitrógeno y promover su crecimiento. En un primer experimento la meta era determinar la máxima concentración de diferentes D-Aminoácidos (D-Alanina, D-Fenilalanina, D-Triptófano, D-Metionina, D-Histidina, D-Glutamato, D-Leucina, D-Tirosina, DArginina y D-Serina) que puede ser tolerada por el genotipo silvestre Col-0 y las líneas mutantes knock out: aap1, aap5 y lht-1 de la planta modelo Arabidopsis thaliana y comparar la tolerancia de estos genotipos a concentraciones tóxicas de estos D-Aminoácidos, lo cual permitiría evaluar si estos compuestos están siendo importados al interior de la planta de forma activa con la participación de los transportadores transmembrana LHT-1 (Lysine Histidine Transporter 1), AAP1(Amino Acid Permease 1) y AAP5 (Amino Acid Permease 5) que primordialmente transportan L-Aminoácidos o si por el contrario estos DAminoácidos ingresan a la planta por difusión o algún otro mecanismo aún no identificado.