Localización histológica de triterpenos en raíces silvestres e in - vitro de Cecropia angustifolia
| dc.audience | Todo Público | |
| dc.contributor.advisor | Vivas Moncayo, Juan Esteban | |
| dc.contributor.advisor | Montoya Peláez, Guillermo León | |
| dc.contributor.author | Muñoz Bonilla, Paula Catherine | |
| dc.coverage.spatial | Cali de Lat: 03 24 00 N degrees minutes Lat: 3.4000 decimal degrees Long: 076 30 00 W degrees minutes Long: -76.5000 decimal degrees. | |
| dc.date.accessioned | 2025-03-12T15:38:40Z | |
| dc.date.available | 2025-03-12T15:38:40Z | |
| dc.date.issued | 2024-06-12 | |
| dc.description.abstract | Los triterpenos pentacíclicos ácidos (TPAs) son productos naturales de gran interés debido a su potencial terapéutico en la diabetes mellitus tipo 2. Estos están presentes en la especie Cecropia angustifolia , principalmente en sus raíces. Aunque se conoce su capacidad de biosíntesis , hay una falta de conocimiento sobre el almacenamiento y localización de estos compuestos en el tejido vegetal. Es por esto que se diferenció la ubicación de TPA a partir de muestras de tejido radicular in vitro y silvestre de C . Angustifolia . Este proceso implicó establecer protocolos de tinción, centrados en procesos de análisis morfológico, derivatización de TPAs y tinción compar ativa con Sudan III, a partir de la visualización por microscopía óptica y de fluorescencia; verifi cando por espectrometría de masas las zonas con fluorescencia diferencial. Los protocolos obtenidos fueron desarrollados en muestras radiculares obtenidas de diferentes tratamientos . Se determinaron las principales estructuras radiculares a partir de la ob servación de la tinción con Safranina y Fast Green, además de localizar las zonas derivatizadas con fluorescencia diferencia l , utilizando ambos métodos de microscopía. S e determinó que el córtex radicular era la estructura que presentaba zonas de acumulación de TPAs. La verificación de estas zonas por espectrometría de masas indicó la presencia de moléculas de 706, 713 y 729 m/z, correspondiendo a las masas de los TPAs derivatizados y sus aductos de sodio. Además, la tinción con Sudan III mostró una presencia generalizada de lípidos en el tejido radicular. El protocolo establecido fue exitoso para la determinación de las zonas de acumulaci ón en raíces con diferentes tratamientos a partir de procesos de tinción y derivatización, así como su verificación por espectrometría de masas . | spa |
| dc.description.tableofcontents | Índice de tablas -- Índice de figuras -- Resumen ejecutivo -- Palabras clave -- Introducción -- Metodología -- 1. Revisión bibl iográfica -- 2. Obtención de las muestras de tejido radicular -- a. Establecimiento de cultivos in - vitro de Cecropia angustifolia -- b. Selección del material vegetal -- 3. Procesamiento histológico convencional -- a. Fijación y deshidratación -- b. Emparafinado -- c. Corte de las muestras en microtomo -- 4. Tinciones generales para la caracterización de la morfología radicular -- 5. Preparación de las muestras para cortes en fresco -- a. Preparación de la matriz de soporte -- b. Fijación de las raíces a la matriz -- 6. Corte histológico del tejido radicular y fijación de muestra -- 7. Proceso de tinción de las muestras radiculares -- a. Derivatización de triterpenos pentacíclicos ácidos -- b. Tinción con Sudan III -- 8. Revisión del tejido radicular teñido -- a. Observación en microscopio óptico -- b. Observación en microscopio de fluorescencia -- 9. Verificación de zonas derivatizadas -- a. TLC preparativa de extracto de Cecropia angustifolia -- b. Aislamiento y extracción de zonas con fluorescencia -- c. Análisis espectrométrico -- 10. Obtención muestras de C. angustifolia con diferentes concentraciones de TPAs -- a. Obtención de material vegetal en cultivo hidropónico -- b. Simulación de condiciones de estrés a partir de jasmonato de metilo -- c. Obtención de muestras con baja presencia de TPAs -- 11. Análisis de las muestras procesadas y comparación de los resultados -- Resultados y discusión -- Procesamiento histológico convencional -- Identificación morfológica a partir de tinción general de estructuras radiculares y análisis por microscopia óptica y de fluor escencia -- Realización de cortes histológicos en vibratomo -- Determinación de zonas de acumulación a partir de tinción y derivatización -- Revisión del protocolo en muestras con diferentes concentraciones de TPAs -- Extracción de TPAs der ivatizados y análisis espectrométrico -- Conclusiones -- Agradecimientos -- Referencias bibliográficas -- Índice de tablas -- Tabla 1. Componentes del medio de cultivo Achiva - 2 -- Tabla 2. Proporciones y tiempos de las soluciones para deshidratación -- Tabla 3. Protocolo de tinción general de tejido vegetal modificado de la bibliografía -- Tabla 4. Soluciones implementadas para el proceso de derivatización de TPAs -- Índice de figuras -- Figura 1 . Esquema de montaje hidropónico -- Figura 2 . Esquema SIP inducido con jasmonato de metilo -- Figura 3 . Desarrollo de cortes en micrótomo rotatorio de tejido incluido en parafina -- Figura 4 . Raíz teñida con Safranina - Fast Green (40x) -- Figura 5 . Raíz de C. angustifolia teñida con Safranina - Cristal Violeta A. Visualización en microscopio óptico (10x). B. Visualización bajo filtro DAPI (10x). C. Visualización bajo filtro FITC (10x) -- Figura 6 . Desarrollo de cortes en vibratomo de muestras incluida en matriz de agarosa al 5% -- Figura 7 . Raíz de C. angustifolia derivatizada bajo filtro DAPI. A. Identificación de las estructuras radiculares (10x). B. Visualización de zonas con fluorescencia diferencial (10x). C. Visualización bajo filtro FITC (10x) -- Figura 8 . Raíz teñida con Sudan III. A . Muestra con tinción positiva a lo largo de todo el tejido (10x). B. Muestra con tinción positiva en la zona del córtex (10x) -- Figura 9 . Visualización bajo filtro DAPI de muestras derivatizadas. A. Corte con menor concentración de TPAs (10x). B. Corte obtenido del SIP inducido con MeJa (10x). C. Corte obtenido de cultivo hidropónico (10x). D. Corte obtenido del SIP inducido con MeJa con multiples puntos de fluorescencia diferenciada (10x) -- Figura 10 . Análisis de TPAs derivati zados con cumarina. A. Fracciones seleccionadas de TLC preparativa de extracto silvestre . B. Espectro de masas de la F2 en modo ES+ . Señalado se encuentra el aducto de sodio de lo s TPAs derivatizados de masa 706 -- Figura 11 . Espectro de masas de TPAs derivatizados con relaciones m/z entre 690 y 705 en modo ES +. A. Muestra obtenida de cultivo hidropónico. B. Muestra obtenida de SIP inducido con MeJa. C. Muestra obtenida de cultivo in - vitro -- Figura 12 . Espectros de masas de TPAs derivatiza dos con relaciones m/z entre 713 y 733 en modo ES +. A. Muestra obtenida de cultivo hidropónico. B. Muestra obteni da de SIP inducido con MeJa. C. Muestra obtenida de cultivo in - vitro | |
| dc.format.extent | 41 páginas | |
| dc.format.mimetype | application/pdf | |
| dc.identifier.OLIB | https://biblioteca2.icesi.edu.co/cgi-olib/?oid=363912 | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10906/130181 | |
| dc.language.iso | spa | |
| dc.publisher | Universidad Icesi | |
| dc.publisher.faculty | Barberi de Ingeniería, Diseño y Ciencias Aplicadas | |
| dc.publisher.place | Santiago de Cali | |
| dc.publisher.program | Biología | |
| dc.relation.references | 1. Fazili, M. A., Bashir, I., Ahmad, M., Yaqoob, U. & Geelani, S. N. In vitro strategies for the enhancement of secondary metabolite production in plants: a review. Bull Natl Res Cent 46 , (2022). | spa |
| dc.relation.references | 2. Motolinía‐alcántara, E. A., Castillo‐araiza, C. O., Rodrígue z‐monroy, M., Román‐ guerrero, A. & Cruz‐sosa, F. Engineering Considerations to Produce Bioactive Compounds from Plant Cell Suspension Culture in Bioreactors. Plants 2021, Vol. 10, Page 2762 10 , 2762 (2021). | spa |
| dc.relation.references | 3. Thomford, N. E. et al. Natural Products for Dr ug Discovery in the 21st Century: Innovations for Novel Drug Discovery. Int J Mol Sci 19 , (2018). | spa |
| dc.relation.references | 4. Rosselli, P. F. & Berg, C. C. Distributional patterns of cecropia (Cecropiaceae): a panbiogeographic analysis. Caldasia 19 , 285 – 296 (1997). | spa |
| dc.relation.references | 5. Raz, L. & Ag udelo Zamora, H. Catálogo de Plantas y Líquenes de Colombia . vol. 1.1 (Universidad Nacional de Colombia, 2020). | spa |
| dc.relation.references | 6. Haruna, N. H. et al. Immunomodulatory effects and structure - activity relationship of botanical pentacyclic triterpenes: A review. Chinese Her bal Medicines (CHM) 12 , (2020). | spa |
| dc.relation.references | 7. Costa, G. M., Schenkel, E. P. & Reginatto, F. H. Chemical and pharmacological aspects of the genus Cecropia. Nat Prod Commun 6 , 913 – 920 (2011). | spa |
| dc.relation.references | 8. Ortiz, O. O., Rivera - Mondragón, A., Pieters, L., Foubert, K. & Caballero - G eorge, C. Cecropia telenitida Cuatrec. (Urticaceae: Cecropieae): Phytochemical diversity, chemophenetic implications and new records from Central America. Biochem Syst Ecol 86 , (2019). | spa |
| dc.relation.references | 9. Mosquera, C., Panay, A. J. & Montoya, G. Pentacyclic Triterpenes from Cecropia telenitida Can Function as Inhibitors of 11β - Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1. Molecules 2018, Vol. 23, Page 1444 23 , 1444 (2018). | spa |
| dc.relation.references | 10. Xu, C., Wang, B., Pu, Y., Tao, J. & Zha ng, T. Techniques for the analysis of pentacyclic triterpenoids in medicinal plants. J Sep Sci 41 , 6 – 19 (2018). | spa |
| dc.relation.references | 11. El Babili, F., Rey - Rigaud, G., Rozon, H. & Halova - Lajoie, B. State of knowledge: Histolocalisation in phytochemical study of medicinal plant s. Fitoterapia 150 , 104862 (2021). | spa |
| dc.relation.references | 12. Ruzin, S. E. Plant microtechnique and microscopy. Ann Bot 86 , 708 – 708 (2000). | spa |
| dc.relation.references | 13. Suárez, S., Di Palma, M. A., Cardozo, P. & Travaglia, C. Técnicas de histología vegetal: Un abordaje para su utilización en microscopía óptica. 1 , 1 – 109 (2022). | spa |
| dc.relation.references | 14. Leroux, O. Vibratome Sectioning of Plant Materials for (Immuno)cytochemical Staining. Methods in Molecular Biology 2149 , 339 – 350 (2020). | spa |
| dc.relation.references | 15. Falcioni, R., Moriwaki, T., Furlanetto, R. H., Nanni, M. R. & Antunes, W. C. Simple, Fast and Efficient Methods for Analysing the Structural, Ultrastructural and Cellular Components of the Cell Wall. Plants (Basel) 11 , (2022). | spa |
| dc.relation.references | 16. Dey, P. Fluorescence Microscope, Confocal Microscope and Other Advanced Microscopes: Basic Principles and Appl ications in Pathology. Basic and Advanced Laboratory Techniques in Histopathology and Cytology 289 – 301 (2022) doi:10.1007/978 - 981 - 19 - 6616 - 3_27. | spa |
| dc.relation.references | 17. Paës, G. Fluorescent Probes for Exploring Plant Cell Wall Deconstruction: A Review. Molecules 2014, Vol. 19, Pages 9380 - 9402 19 , 9380 – 9402 (2014). | spa |
| dc.relation.references | 18. Li, M. et al. Rhodamine B - based fluorescent probes for molecular mechanism study of the anti - influenza activity of pentacyclic triterpenes. Eur J Med Chem 205 , (2020). | spa |
| dc.relation.references | 19. Rodrigues, C. E., Tonial, M., Schäfer, L., Pasquali, G. & Kist, T. B. L. Performance of 3 - [4 - (bromomethyl)phenyl] - 7 - (diethylamino) coumarin as a derivatization reagent for the analysis of medium and long chain fatty acids using HPLC with LIF detection. Journal of Chromatography B 1100 – 1101 , 50 – 57 (2018). | spa |
| dc.relation.references | 20. Toyo’oka, T. Fluorescent tagging of physiologically important carboxylic acids, including fatty acids, for their detection in liquid chromatography. Anal Chim Acta 465 , 111 – 130 (2002). | spa |
| dc.relation.references | 21. Vasquez - Delgado, J. S., Vivas - Moncayo, J. E., Lopez - Cortes, J. V., Combariza, M. Y. & Montoya, G. Pharmacokinetic assessment and phytochemical triterpene control from Cecropia angustifolia using plant biotechnology. Phytochemical Analysis 34 , 641 – 651 (2023 ). | spa |
| dc.relation.references | 22. Ramirez Ortiz, I. Caracterización histológica de raíces in vitro de Cecropia angustifolia . (Universidad Icesi, 2023). | spa |
| dc.relation.references | 23. Staining Procedures Used by Biological Stain Commission. Postgrad Med J 37 , 798 – 798 (1961). | spa |
| dc.relation.references | 24. Perdomo Castillo, E. A. & Sala zar Ibarguen, V. E. Estandarización de una metodología analítica que permita valorar la producción de triterpenos pentacíclicos ácidos en matrices vegetales. . (Universidad Icesi, 2021). | spa |
| dc.relation.references | 25. Stockert, J. C., Canete, M. & Colman, O. D. Histochemical mechani sm for the orthochromatic staining and fluorescence reaction of lignified tissues. Cell Mol Biol 30 , 503 – 508 (1984). | spa |
| dc.relation.references | 26. Bond, J., Donaldson, L., Hill, S. & Hitchcock, K. Safranine fluorescent staining of wood cell walls. Biotechnic & Histochemistry 83 , 16 1 – 171 (2008). | spa |
| dc.relation.references | 27. Donaldson, L. Autofluorescence in Plants. Molecules 2020, Vol. 25, Page 2393 25 , 2393 (2020). | spa |
| dc.relation.references | 28. Pegg, T. J., Gladish, D. K. & Baker, R. L. Algae to angiosperms: Autofluorescence for rapid visualization of plant anatomy among diverse tax a. Appl Plant Sci 9 , (2021). | spa |
| dc.relation.references | 29. Baldacci - Cresp, F. et al. A rapid and quantitative safranin - based fluorescent microscopy method to evaluate cell wall lignification. The Plant Journal 102 , 1074 – 1089 (2020). | spa |
| dc.relation.references | 30. Crang, R., Lyons - Sobaski, S. & Wise, R. Paren chyma, Collenchyma, and Sclerenchyma. Plant Anatomy 181 – 213 (2018) doi:10.1007/978 - 3 - 319 - 77315 - 5_6. | spa |
| dc.relation.references | 31. Yao, L. et al. Subcellular compartmentalization in the biosynthesis and engineering of plant natural products. Biotechnol Adv 69 , 108258 (2023). | spa |
| dc.relation.references | 32. Nak ata, P. A. Advances in our understanding of calcium oxalate crystal formation and function in plants. Plant Science 164 , 901 – 909 (2003). | spa |
| dc.relation.references | 33. Yoshihara, T. et al. Visualization of Lipid Droplets in Living Cells and Fatty Livers of Mice Based on the Fluorescence of π - Extended Coumarin Using Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy. Anal Chem 92 , 4996 – 5003 (2020). | spa |
| dc.relation.references | 34. Patel, R., Dadida, C., Sarker, K. & Sen, D. SUDAN DYES AS LIPID SOLUBLE ARYL - AZO NAPHTHOLS FOR MICROBIAL STAINING. (2015). | spa |
| dc.relation.references | 35. Hunter, C. A. van der Waals interactions in non - polar liquids. Chem Sci 4 , 834 – 848 (2013). | spa |
| dc.relation.references | 36. Nirmal, D., Teraiya, S. & Joshi, P. Liquid Culture System: An Efficient Approach fo r Sustainable Micropropagation. Current Agriculture Research Journal 11 , 28 – 42 (2023). | spa |
| dc.relation.references | 37. Chelli - Chaabouni, A. Mechanisms and Adaptation of Plants to Environmental Stress: A Case of Woody Species. Physiological Mechanisms and Adaptation Strategies in Plan ts Under Changing Environment 1 , 1 – 24 (2014). | spa |
| dc.relation.references | 38. Okamoto, T., Takatani, S., Motose, H., Iida, H. & Takahashi, T. The root growth reduction in response to mechanical stress involves ethylene - mediated microtubule reorganization and transmembrane receptor - me diated signal transduction in Arabidopsis. Plant Cell Rep 40 , 575 – 582 (2021). | spa |
| dc.relation.references | 39. Brenya, E. et al. Mechanical stress acclimation in plants: Linking hormones and somatic memory to thigmomorphogenesis. Plant Cell Environ 45 , 989 – 1010 (2022). | spa |
| dc.relation.references | 40. Yadav, N. e t al. Impacts on Plant Growth and Development Under Stress. Plant Stress Mitigators: Action and Application 61 – 100 (2022) doi:10.1007/978 - 981 - 16 - 7759 - 5_4. | spa |
| dc.relation.references | 41. George, E. F., Hall, M. A. & Klerk, G. J. De. Plant propagation by tissue culture 3rd edition. Pl ant Propagation by Tissue Culture 3rd Edition 1 , 423 – 465 (2008). | spa |
| dc.relation.references | 42. Misra, R. C., Maiti, P., Chanotiya, C. S., Shanker, K. & Ghosh, S. Methyl Jasmonate - Elicited Transcriptional Responses and Pentacyclic Triterpene Biosynthesis in Sweet Basil. Plant Physio l 164 , 1028 (2014). | spa |
| dc.relation.references | 43. Peña, E. M. B., Bucio, J. L., Rodrí guez, L. I. M. & Cortés, C. N. M. Regulación genética y fisiológica del desarrollo de los pelos radiculares. Ciencia Nicolaita 62 – 83 (2015) doi:10.35830/CN.VI66.225. | spa |
| dc.relation.references | 44. Crang, R., Lyons - Sobaski, S. & Wise, R. Plant Anatomy: A Concept - Based Approach to the Structure of Seed Plants. Plant Anatomy: A Concept - Based Approach to the Structure of Seed Plants 319 – 339 (2018) doi:10.1007/978 - 3 - 319 - 77315 - 5/COVER. | spa |
| dc.relation.references | 45. Stricker, T., Bonner, R., Lisacek, F. & Hopfgartner, G. Adduct annotation in liquid chromatography/high - resolution mass spectrometry to enhance compound identification. Anal Bioanal Chem 413 , 503 – 517 (2021). | spa |
| dc.relation.references | 46. Vasquez Delgado, S. Análisis metabólico comp arativo de extractos de Cecropia sp. de material vegetal y cultivos in vitro con potencial uso en salud humana. (Universidad Icesi, 2022). | spa |
| dc.relation.references | 47. Ertel, K. D. & Carstensen, J. T. Quantitative determination of octanoic acid by high - performance liquid chromatog raphy following derivatization with 4 - bromomethyl - 7 - methoxycoumarin. J Chromatogr A 411 , 297 – 304 (1987). | spa |
| dc.relation.references | 48. Gutiérrez, G. et al. Pentacyclic Triterpene Profile and Its Biosynthetic Pathway in Cecropia telenitida as a Prospective Dietary Supplement. Molecu les 2021, Vol. 26, Page 1064 26 , 1064 (2021). | spa |
| dc.rights | EL AUTOR, expresa que la obra objeto de la presente autorización es original y la elaboró sin quebrantar ni suplantar los derechos de autor de terceros, y de tal forma, la obra es de su exclusiva autoría y tiene la titularidad sobre éste. PARÁGRAFO: en caso de queja o acción por parte de un tercero referente a los derechos de autor sobre el artículo, folleto o libro en cuestión, EL AUTOR, asumirá la responsabilidad total, y saldrá en defensa de los derechos aquí autorizados; para todos los efectos, la Universidad Icesi actúa como un tercero de buena fe. Esta autorización, permite a la Universidad Icesi, de forma indefinida, para que en los términos establecidos en la Ley 23 de 1982, la Ley 44 de 1993, leyes y jurisprudencia vigente al respecto, haga publicación de este con fines educativos Toda persona que consulte ya sea la biblioteca o en medio electrónico podrá copiar apartes del texto citando siempre la fuentes, es decir el título del trabajo y el autor. | spa |
| dc.rights.accessrights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.rights.coar | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 | |
| dc.rights.license | Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0) | en |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ | |
| dc.subject.proposal | Triterpenos pentacíclicos ácidos | spa |
| dc.subject.proposal | Histología vegetal | spa |
| dc.subject.proposal | Derivatización | spa |
| dc.subject.proposal | Microscopía de fluorescencia | spa |
| dc.subject.proposal | Metabolitos secundarios | spa |
| dc.subject.proposal | Cecropia angustifolia | spa |
| dc.subject.proposal | Pentacyclic Triterpenic Acids | eng |
| dc.subject.proposal | Plant Histology | eng |
| dc.subject.proposal | Derivatization | eng |
| dc.subject.proposal | Fluorescence Microscopy | eng |
| dc.subject.proposal | Secondary Metabolites | eng |
| dc.subject.proposal | Cecropia angustifolia | eng |
| dc.subject.proposal | Trabajos de grado de Biología | spa |
| dc.title | Localización histológica de triterpenos en raíces silvestres e in - vitro de Cecropia angustifolia | |
| dc.type | bachelor thesis | |
| dc.type.coar | http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f | |
| dc.type.coarversion | http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 | |
| dc.type.driver | info:eu-repo/semantics/bachelorThesis | |
| dc.type.local | Trabajo de grado | |
| dc.type.version | info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
